〔Proteintech 解析大全〕如何挑選Internal Control ?
 

Internal Control 抗體種類很多,其中包含全細胞、胞漿內控、膜內控或核蛋白內控等,

如:β- actin、β- tubulinGAPDHLamin B,以下簡單介紹選擇內控抗體應遵循的原則。

1、樣本種屬來源:首先考慮實驗樣本來源於何物種。

A、哺乳動物的組織或者細胞樣本,通常選擇 β- actin、β- tubulinGAPDHLamin BHistone H3 等。
B
、其他稀少物種來源,可以參照文獻指導或是選擇高度保守houskeeping gene表達的蛋白質相應的抗體作為內控。

2、目標蛋白分子量:
選擇內控抗體時,應該考慮目的蛋白分子量的大小。通常應該保證目的蛋白與內控蛋白分子量相差 5 kDa 以上但勿差距太大。
如:目的蛋白分子量為 45 kDa,此時不適宜選擇 β-actin 作為內控,可以考慮選擇 GAPDH 或者 β- tubulin 作為內控。

3、目標蛋白表達部位:
針對一般蛋白質檢測,GAPDH、β-actin 或 β-tubulin 可以滿足要求,而如果需要檢測細胞器蛋白時,適宜選擇對應細胞器內控更能體現內部參照的準確性。
如:常用的核內控抗體有 Lamin ALamin BTBPYY1HistoneH3
而對於膜蛋白檢測,常用的內控抗體為 ATP1A1。對於粒線體蛋白的檢測,常用 VDAC1 COX IV 作為內控抗體。

≡ 以上原則僅針對通常情況,需要特別注意的是內控的選擇還須考慮實際實驗環境狀況,如某些細胞或組織由於缺氧、糖尿病等因素會導致 GAPDH 的表達量增高,此種狀況下 GAPDH 不適合做內控;在涉及細胞增殖相關實驗中,c-Jun 由於自身表達變化就不適合做內控;在凋亡實驗中,TBPLamin 等不適合作為核內控。

因此在設計實驗方案時應考慮這些因素的影響並查詢相關文獻,如果在實驗過程中出現內控表達出現異常狀況應及時分析原因並調整內控選擇。  

 

 

想挑選"Internal Control" 卻不知道從何下手嗎🤔?

Internal Control 抗體種類很多,其中包含全細胞或胞漿內控、膜內控、核蛋白內控等,比如 β- actinβ- tubulinGAPDHLamin B 等,三大首選原則
1
、樣本種屬來源:首先考慮實驗樣本來源於何物種
2
、目標蛋白分子量
3
、目標蛋白表達部位

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