商品簡介

RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一種傳統的細胞及組織快速裂解液。RIPA裂解液有很多配方，servicebio裂解效果主要分為強效型、溫和型兩種。RIPA強解液裂解組織、細胞得到的蛋白樣品可以用於常規的PAGE、Western等對蛋白活性沒有嚴格要求的實驗。本產品主要成分包含50 mM Tris-HCl (pH 7.4)，150 mM NaCl，1 mM EDTA-2Na，1% Triton X-100，1%脫氧膽酸鈉及0.1% SDS。本產品適用於動物或植物組織及細胞樣品，也可用於真菌或細菌樣品。


實驗步驟

自備蛋白酶抑制劑。RIPA裂解液（強）在臨用前需加入蛋白酶抑制劑，推薦G2006，G2007，G2008等，防止蛋白降解。以下使用方法中提到的RIPA裂解液(強)均指已添加蛋白酶抑制劑。

對於組織樣品：

1. 組織塊用預冷PBS（推薦G4202）洗滌，去除血汙，剪成細小碎塊置於勻漿器中。

2. 加入10倍組織體積RIPA裂解液(強效型)低溫研磨（推薦Servicebio自主研發生產的高速組織研磨儀KZ-III-F及KZ-III-FP）。注意: RIPA裂解液(強效型)的使用量可按照約每50 mg組織與1 mL裂解液的比例添加。如組織蛋白含量較低，可降低裂解液的用量，以提高粗提溶液中的蛋白濃度。

3. 將研磨液轉移至1.5 mL離心管中，振蕩。冰浴30 min，期間每10 min用移液器反覆混勻，確保組織細胞完全裂解

4. 12,000 g 離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。

對於貼壁細胞樣品：

1. 用PBS清洗細胞2-3次，最後一次徹底吸乾殘留液。

2. 按照6孔板每孔細胞250 μL裂解液的比例吸取RIPA裂解液(強)於細胞培養板、瓶內，反覆晃動培養板、瓶，使裂解液與細胞充分接觸3-5 min。

3. 用細胞刮刀將細胞刮下，收集到離心管中。

4. 冰上裂解30 min。

5. 12,000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。

對於懸浮細胞樣品：

1. 離心收集細胞。

2. 按照6孔板每孔細胞250 μL裂解液的比例將細胞液與RIPA裂解液(強)混合，振蕩。

3. 冰浴30 min，期間每10 min用移液器反覆吹打數次，確保細胞完全裂解。

4. 12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。

對於細菌或真菌樣本：

1．取1 mL菌懸液，離心去上清，PBS洗滌一次，充分去除液體。vortex 使菌體盡量分散。

2．加入100-200 μL RIPA裂解液(強)，輕輕 vortex 使菌體與裂解液充分混勻。

3．冰浴10 min，期間每2 min用移液器反覆混勻數次，確保菌體完全裂解。

4．12,000 g 離心5 min，收集上清液，即為總蛋白溶液。