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在穩定條件下細胞內蛋白質的合成與分解處於動態平衡。但在體外條件下從細胞和組織中提取蛋白質時,因細胞中含有許多能降解蛋白的內源性蛋白酶,例如磷酸酶,絲氨酸蛋白酶等。這些普遍存在的內源性蛋白酶會導致目的蛋白分解,從而影響實驗結果。為了避免蛋白降解,通常需要在提取蛋白時加入蛋白酶抑制劑。PMSF即Phenylmethanesulfonyl fluoride,中文名為苯甲基磺酰氟,分子式C7H7FO2S,分子量174.19,以不可逆方式抑制絲氨酸蛋白酶(如胰蛋白酶,胰凝乳蛋白酶,凝血酶)和巰基蛋白酶(如木瓜蛋白酶)。
實驗步驟
1. 本產品濃度為PMSF 100 mM,建議工作液終濃度為1 mM。
2. 使用前5分鐘,按每毫升蛋白裂解液中加10微升本產品的比例配制所需要的用量,混合後備用。
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