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Servicebio PNGase F (Peptide-N-Glycosidase F)
商品編號：G3468-25000U
Servicebio Peptide-N-Glycosidase F簡稱PNGase F，來源於Chryseobacterium miricola的糖苷酶F，由大腸桿菌重組表達，可以裂解由天冬酰胺連接的高甘露糖、雜合和覆雜的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位點為糖蛋白側N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨殘基之間的酰胺鍵，同時將酶解後蛋白上的天冬氨酰轉化為天冬氨酸。主要用於去除蛋白質的N糖基化。
來源：來源於Chryseobacterium miricola，大腸桿菌重組表達；
酶活定義：在37℃條件下，1 h將10 μg變性的RNase B中除去超過95%的碳水化合物所需的酶量定義為一個酶活單位；
純度及濃度：SDS-PAGE檢測純度＞95%；內源性核酸殘留量＜1 pg/μL（qPCR檢測）；500 U/μL；
失活或抑制：75℃加熱10 min即可失活；
酶存儲buffer：
20 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，5 mM EDTA，50% Glycerol，pH 7.5；
10х Denaturing Buffer：5% SDS，400 mM DTT；
10х Native Buffer：400 mM sodium Phosphate，pH 7.5；
用PNGase F處理底物RNase B去糖基化效果圖。底物RNase B變性處理後，取10 μg分別加入不同酶量的PNGase F（0、10、1、0.5、0.1 U），37℃孵育1 h後全部PAGE電泳檢測。
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Component Number |
Component |
G3468 |
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G3468-1 |
Peptide-N-Glycosidase F |
50 μL |
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G3468-2 |
10х Denaturing Buffer |
1 mL |
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G3468-3 |
10х Native Buffer |
1 mL |
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說明書 |
1份 | |
操作步驟
1. 變性條件下蛋白質去糖基化：
在1-20 μg蛋白質樣品中加入1 μL 10х Denaturing Buffer和dH2O至10 μL反應體系，體系在100℃中孵育10 min。待反應體系溫度恢覆常溫後，再加入2 μL 10х Native Buffer、2 μL 10% NP-40、1 μL PNGase F和適量dH2O至20 μL反應體系，37℃孵育1 h。（註：PNGase F的活性會受到SDS抑制，因此在變性條件下必須加入NP-40）
2. 非變性條件下蛋白質去糖基化：
在1-20 μg蛋白質樣品中加入2 μL 10х Native Buffer、2-5 μL PNGase F和適量dH2O至20 μL反應體系，37℃孵育4-24 h。（非變性條件下蛋白質去糖基化需要更長的反應時間或更多的酶）
注意事項
1. PNGase F的活性會收到SDS抑制，因此在變性條件下必須加入NP-40。
2. 評估蛋白質去糖基化的程度，最簡單的方法是通過SDS-PAGE凝膠電泳檢測。
3. 酶的取用都應放在冰盒內，使用完畢後立即存儲於-20℃。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。
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