產品簡介

Servicebio Coomassie Brilliant Blue G250能與蛋白質快速結合。Servicebio Coomassie Brilliant Blue G250在遊離狀態下最大光吸收在488 nm，其與蛋白質結合後呈藍色，在595 nm處有最大吸收值，並且光吸收值與蛋白質含量成正比，因此可用於蛋白質的定量檢測。本產品也可以作為G2001 Bradford法蛋白定量檢測試劑盒的補充試劑。

實驗步驟

1. （可選）繪制標準曲線：將BSA用水溶解配至0.5 mg/mL的蛋白標準工作液。將蛋白標準工作液分別按0，1，2，4，8，12，16，20 μL加到96孔板中，然後用PBS或ddH2O依次加20，19，18，16，12，8，4，0 μL將上述梯度工作液補足到20 μL。得到蛋白濃度依次為0，25，50，100，200，300，400，500 μg/mL的梯度曲線。如只是做相對定量比較，則無需繪制標準曲線。

2. 準備待測樣品：將待測的蛋白樣品進行適當稀釋（可通過預實驗檢測，使樣品蛋白濃度在標準曲線範圍內，確保檢測結果可信），按照每個樣品20 μL的量加到96孔板中。待測樣品稀釋需與蛋白標準品用相同溶液。

3. 檢測：以上每孔加入200 μLCoomassie Brilliant Blue G250溶液充分混勻（可將96孔板放在振蕩器上振盪30 s），室溫放置3-5 min後，以標準曲線0號做參比，在595 nm波長下比色測定，記錄各孔吸光度值。

4. 計算：以標準曲線中梯度蛋白含量（μg/mL）為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪出標準曲線。根據所測樣品的吸光值，在標準曲線上即可查得相應孔中待測樣品的蛋白濃度（μg/mL），再乘以樣品稀釋倍數即為待測樣品實際蛋白濃度。

如用分光光度計測定，則用玻璃試管或玻璃比色管為反應容器制作標準曲線。待測蛋白樣品做適當稀釋後，加入到新的玻璃試管或比色管中，樣品量為1 mL。向標準曲線梯度管及樣品管中各加入Coomassie Brilliant Blue G250溶液3 mL，充分混勻，室溫靜置3-5 min後用分光光度計進行比色檢測。

檢測時分光光度計波長設置595 nm，以標準曲線0號管為參比調零，檢測標準曲線及待測樣品。按照步驟4的方法繪制標準曲線及計算待測樣品中的蛋白濃度。