產品介紹
Protein A是一種發現於金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的細胞壁表面蛋白，分子量為42 kDa；Protein G是C型或G型鏈球菌(Streptococcal bacteria)表達的免疫球蛋白結合蛋白；Protein A和Protein G功能相似，能特異性地與哺乳動物免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)結合；經重組改造的Protein A、G與凝膠以一定的方式結合，可用於免疫沈澱或抗體的純化；Protein A凝膠適合於結合human IgG1、IgG2、IgG4，mouse IgG2a、IgG2b等，而Protein G凝膠適合於結合human IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3，rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c等多克隆抗體（具體信息見附表一）。
本產品采用Servicebio自主研發生產的Protein G蛋白標記磁珠，與市場上同類產品相比，該產品結合抗體效率更高，非特異性結合率更低，配合優化後的緩沖液，可便捷高效的進行免疫沈澱實驗；可廣泛應用於細胞裂解物、細胞分泌上清、血清、腹水等樣品中目標蛋白的分離與純化。
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特點 |
描述 |
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產品內容 |
50%(v/v) agarose in specific protective buffer |
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類型 |
6% agarose cross-linked agarose |
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偶聯蛋白 |
Protein G |
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偶聯蛋白分子量 |
~25 kDa（Protein G） |
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結合蛋白能力 |
>1mg小鼠抗體 /ml |
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特異性 |
來自不同物種的抗體，包括小鼠、人源、大鼠、山羊、棉羊、牛 |
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尺寸 |
30~150 μm |
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洗脱方法 |
酸洗或 1x SDS‐PAGE loading buffer (reduced)洗脫 註意：如果使用 1x SDS‐PAGE loading buffer (reduced)洗脫，抗體的重鏈（~50 kDa）和輕鏈（~25 kDa）會從磁珠上變性釋放出來 |
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應用 |
蛋白免疫沉澱，蛋白純化 |
內容物
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Component Number |
Component |
G2206-1ML |
G2206-5ML |
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G2206 |
SweAgrose Protein G Antibody Purified agarose |
1 mL |
5 mL |
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Manual |
1pc |
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實驗步驟
1. 實驗開始前的準備：
抗體純化相關試劑配方參考如下，用戶可根據具體實驗情況自行調整
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Component |
Reagent combination |
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Binding Wash Buffer |
PBST：137 mM NaCl，2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2.0 mM KH2PO4, 0.1% Tween-20 |
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Elution Buffer |
100 mM Gly, 0.1% Tween-20, pH 2.5 |
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Neutralization Buffer |
1.0 M Tris-HCl, pH 9.0 |
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Preservation Buffer |
PBST，0.1% (v/v) Proclin 300 |
手動操作步驟（以純化小鼠腹水IgG為例）
1. 樣本處理：取腹水樣本500 μL，不足的加入結合洗滌液補足500 μL，若樣本中有較多蛋白沈澱離心後取上清進行實驗，可提高抗體純度；
2. 磁珠預處理：將抗體純化磁珠渦旋振蕩30 s，使其充分重懸，取100 μL 50%（v/v） SweAgarose Protein G抗體純化磁珠置於另一新1.5 mL EP管中，6000×g在4℃離心30s，吸除上清，用1 mL結合洗滌液洗滌2次，離心分離後棄上清；
注意：磁珠量可根據樣本中抗體含量調節；
3. 抗體吸附：向步驟2磁珠中加入步驟1處理的樣本，渦旋混勻，在室溫下（約25℃）置於翻轉混合儀或者手動輕柔翻轉EP管，使凝膠與樣本充分接觸，翻轉15 min後，6000×g在4℃離心30s，吸除上清液；
4. 磁珠洗滌：向EP管中加入1 mL結合洗滌液，振蕩重懸後，6000×g在4℃離心30s，棄上清，重覆操作3次；
5. 抗體洗脫：在上述完成磁珠洗滌的EP管中加入 0.5~1.0 mL洗脫液，用移液器吹打或者渦旋震蕩下迅速重懸，然後在室溫下（約25℃）置於翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉EP管，翻轉10 min後，6000×g在4℃離心30s，收集上清液至新的EP管。
6. 抗體中和：在步驟5抗體洗脫液中加入一定量的中和液，一般為抗體洗脫體積的1/10（例如抗體洗脫液為500 μL，則中和液的添加量為50 μL），最終使洗脫的抗體pH 值保持中性環境，以利於維持抗體的生物活性，避免抗體失活；
7. 磁珠後處理：使用後的磁珠用洗脫液洗滌2次，，6000×g在4℃離心30s，棄上清液；接著用結合洗滌液洗滌3次，，6000×g在4℃離心30s，棄上清液，加入200 µL保存液重懸磁珠，置於2~8℃保存。
