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Servicebio Alkaline Phosphatase
商品編號：G3400-1000U
Servicebio生產的Alkaline Phosphatase ，是一種來自南極微生物（TAB5）的、熱不穩定的、經大腸桿菌重組表達純化的鹼性磷酸酶，可以非特異性催化去除DNA、RNA、dNTP、rNTP 5'或3'末端磷酸基團。Alkaline Phosphatase在分子生物學中廣泛應用，例如去除DNA和RNA的磷酸化末端，以便後續用於探針的克隆或末端標記；在分子克隆實驗中，去磷酸化可以阻止線性化質粒DNA的自我連接；它也可用於降解PCR反應中未結合的dNTP，用於後續測序或SNP分析。
特點：快速去磷酸化；對熱不穩定，80℃孵育2 min即可完全失活。
來源：攜帶TAB5堿性磷酸酶基因的大腸桿菌菌株；其單體分子量約35 kDa；
酶活性定義：在37℃孵育30 min將1 µg線性化的pUC19載體去磷酸化所需酶量定義為一個酶活單位。去磷酸化作用被定義為載體自連反應抑制率大於95%（通過大腸桿菌轉化來衡量）。
失活或抑制：80℃加熱2 min可使Alkaline Phosphatase充分失活。EDTA等金屬離子螯合劑對Alkaline Phosphatase有抑制作用。
純度及濃度：SDS-PAGE檢測純度≥95%，5 U/μL。
酶儲存緩沖液：10 mM Tris-HCl，1 mM MgCl2，0.01 mM ZnCl2，50% Glycerol，pH 7.4。
10×ALPReaction Buffer：500 mM Bis-Tris-HCl，10 mM MgCl2，1 mM ZnCl2，pH 6.0。
實驗步驟
1. 去磷酸化反應：
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Component |
Volume |
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DNA or RNA sample |
1-5 μg |
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10×ALP Reaction Buffer |
2 μL |
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Alkaline Phosphatase (Thermosensitive) |
1 μL |
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Nuclease Free Water |
To 20 μL |
2. 按上述體系配置好之後，輕輕混勻，隨後將液體離心至管底。
3. 37℃孵育15-30 min。如需獲取更好的去磷酸化效果，可延長孵育時間至60 min。
4. 80℃加熱2 min失活Alkaline phosphatase。
5. 按照後續實驗需求可以使用多種方式（例如DNA純化試劑盒、DNA凝膠回收試劑盒，也可以使用酚氯仿抽提、乙醇沈澱方法）對上述去磷酸化的DNA或RNA進行純化。
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