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Servicebio Blood Direct PCR Kit
商品編號：G3312-01
Servicebio Blood Direct PCR Kit可以對全血樣本進行直接PCR，無需進行DNA提取或樣本制備，適用於新鮮血液、儲存在4℃或凍存的含有EDTA、肝素、檸檬酸鹽等常規抗凝劑的抗凝血以及Whatman903®和FTA®商用卡上的幹血漬，基因組和外源性靶DNA都可以有效擴增。
本試劑盒提供的2×Blood Direct PCR Master Mix經過一系列優化，搭配提供的Blood Direct PCR Enhancer，對血液直擴表現出極高抗抑制作用，擴增長度可達5 kb。此外，本產品中已經加入Loading Dye，PCR產物可直接進行瓊脂糖凝膠電泳。本產品可廣泛適用於高通量血液樣本鑒定。
內容物
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Component Number |
Component |
G3312-01 |
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G3312-1 |
2×Blood Direct PCR Master Mix |
1 mL |
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G3312-2 |
Blood Direct PCR Enhancer |
500 μL |
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G3312-3 |
Nuclease-free Water |
1 mL |
實驗步驟
1. PCR反應：
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Component |
50 μL rxn |
Final Concentration |
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2×Blood Direct PCR Master Mix |
25 μL |
1× |
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Blood Direct PCR Enhancer |
10 μL |
1× |
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Forward Primer (10 μM)a |
2 μL |
0.4 μM |
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Reverse Primer (10 μM)a |
2 μL |
0.4 μM |
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Templateb |
Variable（≤10 μL） |
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Nuclease-free Water |
Up to 50 μL |
a. 引物終濃度使用範圍0.2~1.0 μM，推薦引物濃度為0.4 μM，過少的引物可能會導致擴增產量低或無擴增，過量的引物可能會導致非特異擴增。
b. 血液加入量可以選擇在1-20%之間，推薦5%。Whatman903®和FTA®商用卡上的幹血漬可使用打孔器或剪刀裁剪至1-2 mm2大小。註意：為達到最好的擴增效果，用移液器慢慢的將血液加入到反應體系中，讓其沈澱到反應管底部，加入血液樣本後，不能對反應體系進行混勻操作；血卡則可提前加入反應管中，再加入其余反應體系，以確保其浸入反應體系內。
2. PCR擴增：
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Step |
Temperature |
Time |
Cycles |
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Initial Denaturation |
98℃ |
10 min |
1 |
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Denaturation |
98℃ |
10 sec |
35 |
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Annealinga |
50~65℃ |
20 sec |
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Extensionb |
72℃ |
15~30 sec/kb |
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Final extension |
72℃ |
5~10 min |
1 |
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Hold |
4~16℃ |
Forever |
b. 擴增較短片段（≤2 kb）時延申時間為15 s/kb；擴增較長片段（2-5 kb）時延申時間為30 s/kb。
注意事項
1. 操作之前，請務必認真閱讀本產品說明書。
2. 擴增結束後需要1000×g或者4000 rpm離心1-3 min，取上清進行電泳。
3. 對於長期存放的抗凝血，應盡量避免吸取到血液凝塊。
4. 一般情況下全血濃度在5%時能取得良好擴增效果，若不能，可根據實際情況在1-20%之間調整血液濃度。
5. 對於像禽類或者其他有核紅細胞可適量的降低血液量。
6. 反應液的配制、分裝請使用新的一次性無酶吸頭、盡量避免樣品間的汙染。
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