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Servicebio miRNA First Strand cDNA Synthesis Kit(Tailing Reaction)
商品編號：G3334-25
Servicebio miRNA First Strand cDNA Synthesis Kit(Tailing Reaction)包括miRNA第一鏈cDNA合成的全部試劑。本產品以Total RNA或者miRNA為模板，采用Poly(A) Polymerase加A尾反應和逆轉錄反應同步進行的方法，高效合成多種miRNA第一鏈cDNA。試劑盒還提供後續擴增所需的U6內參（適用於人、大、小鼠樣本）正向擴增引物(U6 Forward PCR Primer)和通用反向擴增引物(Universal Reverse PCR Primer)，合成的單鏈cDNA產物進行後續PCR或qPCR反應時只需要設計正向擴增引物即可。
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Component Number |
Component |
G3334-25 |
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G3334-1 |
miRNA RT Enzyme Mixa |
25 μL |
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G3334-2 |
5×Reaction Bufferb |
100 μL |
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G3334-3 |
U6 Forward PCR Primer (10 μM) |
100 μL |
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G3334-4 |
Universal Reverse PCR Primer (10 μM) |
100 μL |
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G3334-5 |
Nuclease-Free Water |
1 mL |
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Manual |
One copy |
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b：含有逆轉錄引物、dNTP Mixture、ATP和Mg2+。
實驗步驟
1. 推薦反應體系配制（推薦冰上進行反應體系配制）
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Component |
Volume |
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5×Reaction Buffer |
4 μL |
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miRNA RT Enzyme Mix |
1 μL |
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Total RNA/miRNAa |
x μL |
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Nuclease-Free Water |
Add to 20 μL |
2. 輕輕混勻並離心；
3. 加A尾與逆轉錄程序設置；
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Temperature |
Time |
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37℃ |
60 min |
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85℃ |
5 s |
4. 獲得的cDNA反應液推薦進行梯度稀釋後再作為模板進行後續熒光定量PCR。
注意事項
1. 操作過程中註意避免RNase汙染。
2. 逆轉錄產物可以-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝後，於-80℃保存，避免反覆凍融。
3. 試劑盒中包含有定量PCR的通用下遊引物，上遊引物為miRNA特異引物，根據目的miRNA設計，一般情況上遊引物為目的miRNA序列將U變為T。
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