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Servicebio Total Superoxide Dismutase (T-SOD) Activity Assay Kit
商品編號：G4306-48T
超氧化物歧化酶（SOD）能夠催化超氧化物陰離子發生歧化作用，生成過氧化氫和氧氣，是生物體內一種重要的抗氧化酶，對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關重要的作用。
本試劑盒采用WST-1法對SOD活性進行檢測分析。原理如下：黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶的作用下產生超氧化物陰離子，超氧化物陰離子可以與WST-1反應產生黃色水溶性甲臜染料。SOD能夠催化超氧化物陰離子發生歧化反應，降低超氧化物陰離子含量，即SOD的活性與甲臜染料的生成呈現負相關性。因此可通過對WST-1產物的比色分析計算SOD的活力。
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Component Number |
Component |
G4306-48T |
G4306-96T |
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G4306-1 |
SOD Assay Buffer |
15 mL |
30 mL |
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G4306-2 |
SOD chromogenic substrate |
100 μL |
200 μL |
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G4306-3 |
Enzyme stock solution |
50 μL |
100 μL |
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G4306-4 |
PBS buffer |
12.5 mL |
25 mL |
實驗步驟
1. 樣品準備：
1.1. 血漿、血清樣品：可直接用於T-SOD活力檢測；
1.2. 組織樣品：使用合適的緩沖液（PBS緩沖液、生理鹽水等）進行勻漿裂解，其中組織和試劑的比例為1比9（0.1 g：0.9 mL）即可；勻漿裂解後，4℃，10000 g 離心 10-15 min，取上清用於後續T-SOD活力檢測；
1.3. 細胞樣品：細胞收集後，可使用合適的緩沖液重懸細胞，大約每1×106個細胞加300-500 μL PBS緩沖液或生理鹽水；勻漿處理後，4℃，10000 g 離心 10-15 min，取上清用於後續T-SOD活力檢測；
註意：樣本中盡量不要含有SDS、Triton-X-100、Tween20等表面活性劑以及還原型谷胱甘肽、DTT、2-巰基乙醇等還原劑。
2. 檢測前準備：
2.1. SOD顯色底物：SOD檢測緩沖液以1：100混勻配制成SOD檢測工作液，現配現用；
2.2. 酶貯備液吹勻後與SOD檢測緩沖液以1：20混勻配制成酶工作液，現配現用；
3. T-SOD檢測：
3.1. 根據下表操作進行檢測：
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Control well |
Control blank well |
Experimental well |
Experimental blank well |
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Sample |
20 μL |
20 μL |
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Ultrapure water or PBS |
20 μL |
20 μL |
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Enzyme working solution |
20 μL |
20 μL |
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Ultrapure water or PBS |
20 μL |
20 μL |
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Assay working solution |
200 μL |
200 μL |
200 μL |
200 μL |
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Mix well, incubate at 37℃ for 20 minutes, and measure the OD value at 450nm by enzyme labeler |
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注意：檢測工作液加入後，立即開始反應，建議使用多道移液槍添加檢測工作液，以減少實驗誤差；
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