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Servicebio Catalase (CAT) Activity Assay Kit
商品編號：G4307-48T
過氧化氫酶（CAT）是廣泛存在於植物、動物和微生物體內的一種抗氧化酶，其通過催化過氧化氫（H2O2）分解為水和氧氣，來清除體內過氧化氫，是生物防禦體系中的關鍵酶之一。
CAT催化H2O2分解反應，可以被鉬酸銨迅速終止，並且剩余的H2O2和鉬酸銨相互作用產生一種淡黃色的絡合物。該絡合物能夠在波長405 nm處測定，可根據絡合物的變化量來計算CAT的活力。
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Component Number |
Component |
G4306-48T |
G4306-96T |
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G4307-1 |
Hydrogen peroxide standard (9.9 mol/L) |
1 mL |
1 mL |
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G4307-2 |
CAT Assay Buffer |
6 mL |
12 mL |
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G4307-3 |
CAT Assay Substrate |
1 mL |
2×1 mL |
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G4307-4 |
Color developing agent |
6 mL |
12 mL |
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G4307-5 |
Clarifying agent |
0.6 mL |
1.2mL |
實驗步驟
1. 樣品準備：
1.1. 血漿、血清樣品：可直接用於CAT活力檢測；
1.2. 組織樣品：使用合適的緩沖液（PBS、生理鹽水等）進行勻漿裂解，組織和試劑的比例為1：9（0.1 g：0.9 mL）即可；勻漿後，4℃，10000 g 離心 10-15 min，取上清用於後續CAT檢測；
1.3. 細胞樣品：細胞離心後，使用合適的緩沖液重懸細胞，大約每1~2 × 106個細胞加500 μL PBS，勻漿；勻漿後，4℃，10000 g 離心 10-15 min，取上清用於後續CAT檢測；
2. 檢測準備工作：
2.1. 過氧化氫標準品配制：根據需要，使用超純水將過氧化氫標準品（9.9 mol/L）進行梯度稀釋（例如取其10 μL標準品加入980 μL超純水中，稀釋為100 mM，並進一步梯度稀釋做標準曲線，即100/50/25/12.5/6.25/3.125/0 mM），與待測樣品進行後續檢測後，用於標準曲線法數據分析；
2.2. 顯色工作液配制：顯色劑：澄清劑=10：1配制成顯色工作液（現配現用）。
註意：澄清劑低溫會凝固，37℃水浴溶解即可；顯色劑存放過程中析出屬於正常現象，75℃左右水浴覆溶後不影響使用效果。
3. CAT檢測：
3.1. 根據下表操作進行CAT檢測：
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Standard well |
Measurement well |
Control well |
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Standards of different concentrations |
10 μL |
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Sample |
10 μL |
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CAT Assay Buffer |
100 μL |
100 μL |
100 μL |
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Incubate at 37℃ for 5 minutes |
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Ultrapure water |
10 μL |
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CAT Detection Substrate |
10 μL |
10 μL |
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Precise reaction at 37°C for 1 minute |
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Color developing working solution |
110 μL |
110 μL |
110 μL |
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Sample |
10 μL |
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Let it stand for 10 minutes, and measure the OD value at 405 nm by enzyme marker |
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注意事項
1. 過氧化氫不穩定，但並不會影響結果相對趨勢。如果需要絕對數據，客戶可對本產品中過氧化氫標準品濃度進行標定或自備過氧化氫試劑。
2. 如孔中有氣泡，請用槍輕輕吹破，以免影響數據準確性。
3. 為了數據的準確性，確保標準曲線R2＞0.99。
4. 為了您的健康和安全，操作時請穿好實驗服、戴好手套。
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