產品簡介

Servicebio Flag-tag 快篩試劑是基於膠體金側向層析原理，採用競爭法快速檢測細胞培養上清、細胞/細菌裂解產物或蛋白純化產物的Flag標籤蛋白的含量，是一種半定量的Flag蛋白檢測卡。

本產品主要由樣品墊、結合墊、層析膜、吸水紙、背板等結構組成。在層析膜上固定有山羊抗鼠IgG 多克隆抗體（質控線C）和Flag標籤蛋白（檢測線T）；在結合墊上固定有膠體金標記的Flag標籤抗體。當待測樣品滴加到樣品墊時，透過毛細作用，液體會向結合墊移動。如被檢樣本中不含Flag標籤蛋白時，則結合墊上的金標抗Flag標籤抗體與固定在檢測線T處的Flag標籤蛋白結合形成「Au-抗Flag標籤抗體－Flag標籤蛋白」複合物，因而在檢測線T出現一條紅色條帶；如被檢樣本中含有Flag標籤蛋白時，則Flag標籤蛋白與結合墊上的金標抗Flag標籤抗體結合形成「Au-抗Flag標籤抗體－Flag標籤蛋白」複合物，結合墊上未反應的金標抗Flag標籤抗體會與檢測線T上的Flag標籤蛋白反應，T線出現一條紅色條帶，隨著被檢樣本中Flag標籤蛋白含量的增加，T線顯色逐漸減弱，直到完全不顯色。無論被檢樣本中是否存在Flag標籤蛋白，結合墊上的金標抗Flag標籤抗體都會向上層析至質控線C，與羊抗鼠IgG反應出現一條紅色條帶。質控線C所呈現的紅色條帶是判斷層析過程是否正常的標準。


實驗步驟

1. 打開包裝取出檢測卡，平放在實驗台上；

2. 用微量移液器吸取80~100 µL培養上清、細胞/細菌裂解產物或蛋白純化後樣品，滴加到加樣孔中；

3. 靜置8~10 min讀取結果，15 min後判讀結果無效。


結果判斷

1. 陰性結果：在視覺視窗中，質控線C和偵測線T均顯色，此時T線顯色最深；

2. 陽性結果：品管線C顯色，檢測線T顯色較弱或不顯色；

3. 無效結果：品管線C不顯色，不論偵測線T是否為顯色，此時需重新偵測；

4. 註：樣品中不含 Flag-tag蛋白時，檢測線T顯色最深，隨著樣品中Flag-tag標籤蛋白含量的增加，檢測線 T顯色逐漸減弱，直至顯色消失。


結果展示

取出檢測卡，平放在實驗桌上，將帶Flag標籤蛋白用PBS分別稀釋成10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL，然後各取100 μL的稀釋液滴加入加樣孔中，靜置8 min，觀察結果。

                                                                 

                                                         Flag-tag快速偵測卡（膠體金法）8 min的效果圖

靈敏度

最低可偵測濃度為20 μg/mL，當樣品中Flag-tag蛋白含量低於20 μg/mL時，肉眼不易區分。


注意事項

1. 如果樣品的顏色導致背景高，可以使用PBS或培養基稀釋樣品再進行層析。

2. 為了結果的準確性，需設立陰性對照和陽性對照，建議對照樣本與待測樣本為同基質。

3. 此檢測試劑卡不建議凍存。

4. 開封後儘快使用