產品簡介

本公司所生產的全能核酸酶（Benzonase Nuclease），又稱廣效核酸酶，是一種源自於黏質沙雷氏菌（Serratia Marcescen）的非特異性核酸內切酶。此內切酶可以在非常寬泛的條件下攻擊並降解所有形式的DNA和RNA（單鏈、雙鏈、線性、環化），在核酸鏈內任意位置進行切割，將核酸完全降解為3-5個鹼基長度的5'-單磷酸寡核苷酸。工作pH範圍為pH6-10，最適pH為8.0，工作溫度範圍為0-42℃，最適溫度為37℃。全能核酸酶用途廣泛，常用於重組蛋白、病毒疫苗等生物製品中去除核酸，可有效降低細胞、組織、微生物等蛋白質裂解液的黏度等。本產品帶有His-tag，可以透過鎳柱吸附去除。

酵素活性定義：在37℃、pH 8.0反應條件下，2.625 mL反應體系中，在30 min內使△A 260吸收值變化1.0（相當於完全消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所需酶量定義為一個酵素活單位。

純度： SDS-PAGE檢測純度≥95%，無蛋白酶，≥250 U/μL。

酵素儲存緩衝液： 20 mM Tris-HCl，2 mM MgCl 2，2 mM NaCl，50% Glycerol，pH 8.0。

稀釋緩衝液： 20 mM Tris-HCl，2 mM MgCl 2，2 mM NaCl，pH 8.0。

 

圖1. 全能核酸酶使用效果圖。 A，293細胞經RIPA裂解液裂解後，未加入全能核酸酶的樣品基因組DNA大量釋放呈粘稠狀，而加入了全能核酸酶的樣品由於釋放的基因組DNA被降解不粘稠；B，在1 g大腸桿菌濕菌中加入5 mL RIPA裂解液混勻後，分別加入相應量的全能核酸酶（0、80、300 U/mL），室溫處理30 min後拍照觀察；C，分別取40 μg鮭魚精DNA，加入相應量的全能核酸酶，於37℃培養30 min後瓊脂糖凝膠檢測。

儲存與運輸

冰袋（wet ice）運送；-20℃保存，12個月有效。


實驗步驟

1. 用於降低細胞、組織或細菌裂解液的黏度：

細胞樣本： a，貼壁細胞樣本移除培養基後，再用PBS清洗。每1 mL RIPA裂解液（建議G2033、G2002）中加入1-2 μL全能核酸酶，然後依照裂解液的使用說明用於貼壁細胞的裂解。室溫或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，離心後取上清即可進行後續實驗。 b，懸浮細胞樣本離心收集後，去上清。每1 mL RIPA裂解液（建議G2033、G2002）中加入1-2 μL全能核酸酶，然後依照裂解液的使用說明用於懸浮細胞的裂解。室溫或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，離心後取上清即可進行後續實驗。

組織樣本：組織塊用預冷PBS清洗去除血污，剪成細小的碎塊。以每50 mg組織加入1 mL裂解液（建議G2033、G2002）的比例添加，同時加入1-2 μL全能核酸酶。用研磨儀（推薦SWE-C6、SWE-FP）將組織進行研磨，直到充分裂解。組織充分裂解後，室溫或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，離心後取清即可進行後續實驗。

細菌、真菌樣本：細菌或真菌離心收集後，每1 mL裂解液（建議G2033、G2002）中加入1-2 μL全能核酸酶，然後依照裂解液的使用說明用於細菌或真菌的裂解。室溫或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，離心後取上清即可進行後續實驗。

註：常用的裂解液中含有不同濃度的Triton X-100或NP-40、SDS及脫氧膽酸鈉等，這些試劑對全能核酸酶有一定的影響，所以對於不同實驗需要適當增加酵素量或延長孵育時間。

2. 用於去除重組蛋白中的核酸：建議反應體系中全能核酸酶的終濃度為90 U/mL，可降解體系中所有核酸。本產品帶有His-tag，可以透過鎳柱吸附去除。

3. 用於提高包涵體蛋白複性率：推薦細胞裂解液中全能核酸酶的酵素濃度為1 U/mL，可有效降低因基因組DNA而黏附的蛋白酶，提高包涵體純度，最終提高包涵體蛋白的複性速率。

注意事項

1. Mg 2+是全能核酸酶的關鍵催化輔因子，反應緩衝液含有1-2 mM mg 2+對全能核酸酶的活性是必須的。

2. 全能核酸酶建議使用條件請參考下表。

3. 為了您的安全和健康，請穿著實驗服並戴上一次性手套操作。

Condition	Optimal  Range	Effective  Range
Mg 2+	1-2 mM	1-10 mM
pH	8.0-9.2	6.0-10.0
Temperature	37℃	0-42℃
DTT	0-100 mM	＞100 mM
2-Mercaptoethanol	0-100 mM	＞100 mM
Na +、K +、NH 4 +	0-20 mM	0-150 mM
PO 4 3-	0-10 mM	0-100 mM
Triton X-100	-	＜0.4%
Sodium deoxycholate	-	＜0.4%
SDS	-	＜0.05%
Urea	-	＜5 M
(NH 4 ) 2 SO 4	-	＜100 mM